一、服务简介
细胞周期(Cell Cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能(G0期)。 流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测,得到该细胞的光散射和荧光指标,分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。
细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化,如G0/G1期的DNA含量为2C,而G2期的DNA含量是4C。利用PI标记的方法,通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定,可分析细胞周期各时相的百分比。
二、技术流程 1、取对数生长期细胞,倒去培养液,胰酶适度消化细胞,用培养液吹打,800 rpm,离心 15 min去上清。
2、PBS洗2次,加0.5 mL PBS吹匀,务必吹散。
3、用5 mL注射器将细胞吸起,用力打入5 mL 70%(预冷)乙醇中,封口膜封口。4℃固定过夜(可长至2周)。
4、800 rpm 15 min收集固定细胞,PBS洗2次。
5、用0.4 mL PBS重悬细胞并转至Tube中轻轻吹打(防止细胞破碎)。
6、加RNase-A约3 μL至终浓度约为50 μg/mL ,37℃水浴消化30 min;
七、加PI约50 μL至终浓度约为65 μg/mL ,在冰浴中避光染色30 min。
八、用300目(孔径40~50微米)尼龙网过滤,上机检测。
九、样品分析测定及打印。
三、服务说明 1、 客户提供:状态良好的受试细胞;
2、实验周期:1-2周;
3、明确检测时间
4、提供流式原文件
四、成果展示
五、询价及订购
感谢您选择我公司的流式检测细胞周期服务。如有相关问题请联系我们的工作人员。