一、服务简介
RT -PCR即逆转录-聚合酶反应。原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。
二、技术流程
1、设计并合成Realtime PCR引物。
2、引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶进行含SG（SYBR®； Green）的PCR反应的优化。
3、客户样品RNA抽提 。实验对象为组织样品，取适量（50-100mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品加1ml的RNA抽提试剂Trizol（Invitrogen），匀浆后抽提RNA。 实验对象为细胞样品，每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加1mlRNA抽提试剂Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA 。
4、RNA质量检测
a、紫外吸收测定法测定RNA在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，以计算其浓度并评估RNA纯度 。b、使用ambion公司的甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳，检测RNA纯度及完整性。
5.、使用逆转录酶（Promega）进行反应，将样品RNA逆转录为cDNA。
6、制备标准曲线样品： 进行相对定量，需要先将样品的目的基因以及管家基因进行PCR扩增，其产物进行梯度稀释用于做标准曲线。
7、标准曲线样品和待测样品分别加入到含SG的RealTime PCR反应液中，进行 RealTime PCR扩增和检测。 8、检测结果进行标准曲线分析：以对待测样品的目的基因进行定量。相对定量实验需要进一步用样品的目的基因测得值除以管家基因测得值以校正误差，所得结果代表某样品的目的基因相对含量。
9、提供实验报告：包括详细的实验方法及实时荧光定量PCR实验结果的相关图表
三、服务说明
1、请您提供新鲜的且尽量多的材料，或直接提供纯化好的总RNA或DNA（大于5ug/样本）。如是如织：100－200mg
2、请通过EMAIL提供已知的全长基因序列。Email:huameixinan@163.com
3、请提供详细背景资料：DNA/RNA来源，丰度。
四、成果展示
五、询价及订购
感谢您选择我公司的RT-PCR检测服务。如有相关问题请联系我们的工作人员。